無(wú)血清培養(yǎng)基的基本配方:基本成分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基及添加組分兩大部分。 用于生物制藥和疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)，多數(shù)呈貼壁生長(zhǎng)或兼性貼壁生長(zhǎng);而當(dāng)其在無(wú)血清、無(wú)蛋白培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)，由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、膠原、玻表粘連蛋白，細(xì)胞往往以懸浮形式生長(zhǎng)。

　　1、基本介紹

　　無(wú)血清培養(yǎng)基是在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的，與傳統(tǒng)的培養(yǎng)基相比，既能滿足細(xì)胞在體外長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)的要求，又能避免動(dòng)物血清所帶來(lái)的不利因素。

　　在使用無(wú)血清培養(yǎng)基時(shí)，有些細(xì)胞需要逐漸適應(yīng)，即先將原來(lái)的培養(yǎng)基與無(wú)血清培養(yǎng)基混合培養(yǎng)，漸漸地再轉(zhuǎn)為*的無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)。有些貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞，復(fù)蘇時(shí)也可用少量的血清先培養(yǎng)，因?yàn)檠蹇芍?xì)胞貼壁，然后再換成無(wú)血清培養(yǎng)基。

　　2、主要成分

　　無(wú)血清培養(yǎng)基由營(yíng)養(yǎng)較*的基礎(chǔ)培養(yǎng)基和補(bǔ)充因子組成。

　　2.1、基礎(chǔ)培養(yǎng)基

　　在不同細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，根據(jù)細(xì)胞需求對(duì)成分已知的基礎(chǔ)培養(yǎng)基組分進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整即可使細(xì)胞更好地生長(zhǎng)并提高目的產(chǎn)物的表達(dá)量。大多數(shù)人工合成的培養(yǎng)基使用的是Ham F12/DMEM培養(yǎng)液(1:1等體積混合)，然后補(bǔ)加15Mm的HEPES，1.2g/L NaHCO3。

　　2.2、主要補(bǔ)充因子

　　補(bǔ)充因子是代替血清的各種因子的總稱。多數(shù)無(wú)血清培養(yǎng)液必須補(bǔ)加3-8種因子。胰島素和轉(zhuǎn)鐵蛋白是必須補(bǔ)充因子，其他多數(shù)為輔助作用的因子。按其功能不同，補(bǔ)充因子可分為五類(lèi)：

　　激素和生長(zhǎng)因子。很多細(xì)胞用無(wú)血清培養(yǎng)時(shí)需要加入激素，如胰島素、生長(zhǎng)激素、胰高糖素等。胰島素是重要的細(xì)胞存活因子，與細(xì)胞上的胰島素受體結(jié)合后可促進(jìn)RNA、蛋白質(zhì)和脂肪酸的合成，抑制細(xì)胞凋亡。此外，雌二醇、孕酮等也是無(wú)血清培養(yǎng)基中常添加的補(bǔ)充因子。

　　結(jié)合蛋白。常見(jiàn)如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。轉(zhuǎn)鐵蛋白與細(xì)胞上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體結(jié)合是細(xì)胞獲取鐵元素的主要來(lái)源。白蛋白與脂類(lèi)、激素、維生素、金屬離子和生長(zhǎng)因子結(jié)合后可調(diào)節(jié)上述物質(zhì)在無(wú)血清培養(yǎng)基中活性的作用，此外，由于牛血清白蛋白一般添加量比較大，可增加培養(yǎng)基的粘度，保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷。

　　貼壁因子。許多細(xì)胞必須貼壁才能生長(zhǎng)，這種情況下無(wú)血清培養(yǎng)基中一定要添加促貼壁和擴(kuò)展因子，一般為細(xì)胞外基質(zhì)，如纖粘連蛋白、膠原蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細(xì)胞功能的分化因子，對(duì)許多細(xì)胞的繁殖和分化，起著重要作用。纖粘連蛋白主要促進(jìn)來(lái)自中胚層細(xì)胞的貼壁與分化，這些細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞、肉瘤細(xì)胞、粒細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞、CHO細(xì)胞、成肌細(xì)胞、CHO細(xì)胞等。

　　酶抑制劑。培養(yǎng)貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞，需要用胰酶消化傳代，在無(wú)血清培養(yǎng)基中不可少須含酶抑制劑，以終止酶的消化作用，達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。常用的是大豆胰酶抑制劑。

　　其他補(bǔ)充因子。一些細(xì)胞培養(yǎng)使用的無(wú)血清培養(yǎng)基還需要補(bǔ)充微量元素、維生素、脂類(lèi)等低分子量物質(zhì)。